人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆與原核表達

目的 克隆人胸腺素α原/白介素2 融合基因,構建其原核表達載體并在大腸桿菌系統(tǒng)中有效表達.方法 采用RT-PCR方法,從人白血病細胞和人T淋巴細胞中分別擴增得到胸腺素α原/白介素2 基因,利用基因重組技術將融合基因片段重組于pET42a原核表達載體上,構建成pET42a-PI.經(jīng)酶切、測序鑒定后,將重組質粒轉化大腸桿菌Rosseta,IPTG誘導蛋白表達.表達產(chǎn)物經(jīng)離子交換和分子篩純化后進行Western blot分析,通過人外周血單核細胞玫瑰花結實驗對融合蛋白進行了初步的活性測定.結果 凝膠電泳顯示PCR產(chǎn)物的長度約750 bp,測序結果表明,擴增片段與預期序列一致.重組菌在IPTG誘導下表達相對分子質量為28 kDa的蛋白,純化后的融合蛋白能提高人外周血單核細胞玫瑰花結形成率,表明具有一定活性.結論 成功克隆和構建了人胸腺素α原/白介素2融合基因的原核表達載體,并在原核表達系統(tǒng)中得到有效表達.

作 者： 黃明 韋劍 周飛燕 HUANG Ming WEI Jian ZHOU Fei-yan   作者單位： 廣州拜迪生物醫(yī)藥有限公司,廣東,廣州,511495  刊 名： 廣東藥學院學報  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY  年，卷(期)： 2008 24(3)  分類號： Q786  關鍵詞： 胸腺素α原   白介素2   融合蛋白   表達  

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