奧利亞羅非魚促性腺激素釋放激素cDNA的原核表達(dá)及其免疫原性研究

促性腺激素釋放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘腦分泌產(chǎn)生的神經(jīng)激素,對(duì)脊椎動(dòng)物生殖的調(diào)控起重要作用.為研究GnRH對(duì)奧利亞羅非魚性腺發(fā)育的作用,構(gòu)建了GnRH cDNA的原核表達(dá)載體并進(jìn)行融合表達(dá).利用RT-PCR方法從丘腦中擴(kuò)增出長(zhǎng)約400bp的目的序列GnRH基因,克隆至T載體中,經(jīng)酶切鑒定和序列測(cè)定分析確認(rèn)序列的正確性后將此片段克隆到表達(dá)載體pMAL-c2x中構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pMAL-GnRH,并在大腸桿菌TB1中獲得了高表達(dá),目的蛋白約占菌體總蛋白的41.6%.菌體經(jīng)溶菌酶裂解,制備無細(xì)胞抽提液,Amylose-sepharose柱層析后得到分子量為56kD單一條帶的目的蛋白.目的蛋白經(jīng)Factor Xa酶切裂解,Amylose-sepharose過柱純化后得到純化的GnRH前體蛋白.以80μg/只的劑量4次免疫ICR小鼠,免疫小鼠可以檢測(cè)到特異性針對(duì)GnRH前體蛋白的血清抗體應(yīng)答,免疫組抗體水平顯著高于空白組(P＜0.05),且加強(qiáng)免疫第5周后抗體效價(jià)為0.707±0.320,達(dá)到高峰值,說明表達(dá)產(chǎn)物具有免疫原性,可以刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答.

作 者： 丁煒東 曹麗萍 吳婷婷 DING Wei-Dong CAO Li-Ping WU Ting-Ting   作者單位： 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心,農(nóng)業(yè)部水生動(dòng)物遺傳育種和養(yǎng)殖生物學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,無錫,214081  刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(4)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 奧利亞羅非魚   促性腺激素釋放激素   促性腺激素釋放激素相關(guān)肽   原核表達(dá)   抗體   免疫原性  

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