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微柱液相色譜-電化學(xué)法檢測(cè)鼠紋狀體單胺類物質(zhì)的含量
單胺類神經(jīng)遞質(zhì)(Monoamines), 包括兒茶酚胺(Catecholamine)和5-羥色胺(Serotonin), 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起重要作用. 對(duì)其含量的準(zhǔn)確測(cè)定在基礎(chǔ)研究和臨床診斷中均具有重要的意義. 微透析是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的活體取樣技術(shù)[1], 為腦功能的研究提供了極為有力的手段, 本實(shí)驗(yàn)室在此方面進(jìn)行了多年的研究[2,3]. 微透析與液相色譜電化學(xué)檢測(cè)聯(lián)用[4], 可測(cè)定神經(jīng)細(xì)胞外液遞質(zhì)的含量及釋放量, 據(jù)此可對(duì)一系列重要的生理、病理和藥理現(xiàn)象做出解釋. 但使用常規(guī)高效液相色譜柱(?=4.6 mm i.d.)尚存在不足之處. 首先, 透析液中神經(jīng)遞質(zhì)的濃度很低, 接近甚至低于檢測(cè)器的濃度檢出限; 其次, 為使樣品得到較好檢測(cè), 需加大進(jìn)樣量(通常需25 μL), 從而需更長(zhǎng)的取樣時(shí)間, 使得方法的時(shí)間分辨率降低, 難以反映體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化. 為克服這些缺點(diǎn), 近年來, 微柱液相色譜電化學(xué)檢測(cè)(Microbore HPLC-ECD)技術(shù)受到了重視[5], 高效微徑柱的使用大大降低了峰展寬效應(yīng), 抑制了組分的稀釋, 極大地提高了檢測(cè)靈敏度. 同時(shí), 進(jìn)樣量的降低也使得時(shí)間分辨率得以提高(進(jìn)樣量為1~5 μL, 相當(dāng)于采樣時(shí)間1~5 min), 使以分鐘為單位的動(dòng)態(tài)檢測(cè)成為可能. 本文采用Microbore HPLC-ECD的方法, 建立了測(cè)定鼠腦紋狀體內(nèi)DA, DOPAC, 5-HIAA和HVA含量的方法, 實(shí)現(xiàn)了采樣間隔為5 min的動(dòng)態(tài)檢測(cè).
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