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3-甾酮-1-脫氫酶基因在大腸桿菌中的表達及甾體轉(zhuǎn)化研究
將簡單節(jié)桿菌3-甾酮-1-脫氫酶基因(ksdD)克隆到大腸桿菌表達載體pET-22b(+)上,構建重組質(zhì)粒pET-ksdD,利用IPTG誘導酶在大腸桿菌BL21(DE3)中的表達,4h后取樣,分別對超聲破碎后的上清和沉淀進行SDSPAGE和酶活分析,結(jié)果表明表達出的3-甾酮-1-脫氫酶的分子量大約為56kD,超聲破碎后的細胞破碎液對4-AD的轉(zhuǎn)化率較簡單節(jié)桿菌提高了近10倍.
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