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絲瓜籽核糖體失活蛋白luffin-a的克隆表達(dá)及其cDNA序列分析
目的: 從絲瓜籽中克隆核糖體失活蛋白luffin-a 基因,并在原核系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá).方法: 根據(jù)已報(bào)道的cDNA 序列設(shè)計(jì)引物,用RT-PCR 的方法從成熟的絲瓜籽中克隆luffin-a 基因,克隆后鑒定核苷酸序列.構(gòu)建表達(dá)載體pET-28a(+)-luffin-a,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21 (DE3) ,并經(jīng)IPTG 誘導(dǎo)表達(dá).利用金屬離子親和層析的方法純化所得目的蛋白.結(jié)果: 克隆的luffin-a 基因及其所編碼的氨基酸序列與國外報(bào)道的核苷酸序列及氨基酸序列同源性分別為95%和92% ,因而所獲得的luffin-a基因是絲瓜籽核糖體失活蛋白luffin-a一個(gè)新的cDNA序列.經(jīng)SDS-PAGE分析: luffin-a 主要存在于包涵體中.金屬離子親和層析可純化目的蛋白.結(jié)論: 本研究成功地克隆了luffin-a 一個(gè)新的序列,并建立了該蛋白的原核表達(dá)系統(tǒng),同時(shí)利用親和層析可一步法純化獲得目的蛋白.
作 者： 王怡 孫萍 詹林盛 宋麗潔 李暉 孫紅琰 WANG Yi SUN Ping ZHAN Lin-Sheng SONG Li-Jie LI Hui SUN Hong-Yan 作者單位： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所,北京,100850 刊 名： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊 ISTIC PKU 英文刊名： BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES 年，卷(期)： 2006 30(4) 分類號： Q523 關(guān)鍵詞： 核糖體 luffin-a 序列分析,DNA 金屬離子親和層析 基因表達(dá)【絲瓜籽核糖體失活蛋白luffin-a的克隆表達(dá)及其cDNA序列分析】相關(guān)文章：
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