PSF不同功能片段融合蛋白的構(gòu)建及其在細胞內(nèi)的分布

目的 將人類PSF基因的不同功能片段定向連入pEGFP-C2質(zhì)粒,使PSF蛋白的各功能片段與綠色熒光蛋白在HeLa細胞內(nèi)融合表達,觀察其在HeLa細胞中的表達及定位. 方法 以重組質(zhì)粒pEGFP-C2-PSF為模板,PCR法擴增出目的基因,將擴增片段雙酶切后連接到質(zhì)粒pEGFP-C2上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-C2- PSF(Ⅰ～Ⅴ).將構(gòu)建成功的pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ)質(zhì)粒脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HeLa細胞,Western印跡檢測融合蛋白的表達,并在熒光顯微鏡下觀察融合蛋白的定位與分布. 結(jié)果 成功構(gòu)建質(zhì)粒pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ),并在HeLa細胞中實現(xiàn)表達;Western印跡檢測到融合蛋白GFP-PSF(Ⅰ～Ⅴ);在激光共聚焦顯微鏡下觀察到綠色的融合蛋白表達和定位. 結(jié)論 人類PSF基因的不同功能片段的重組質(zhì)粒pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ)構(gòu)建成功,可用于標記PSF蛋白的不同功能片段,為進一步研究PSF在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用機制以及其生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ).

作 者： 張馨予 東莉潔 付曉 楊振霞 楊潔 ZHANG Xinyu DONG Lijie FU Xiao YANG Zhengxia YANG Jie   作者單位：   刊 名： 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2010 7(2)  分類號： Q7  關(guān)鍵詞： 人類PSF蛋白   pEGFP-C2   重組質(zhì)粒   融合蛋白   human PSF protein   pEGFP-C2   recombinant plasmid   fusion protein  

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