大腸桿菌O157:H7 sRNA基因E40缺失突變株的構(gòu)建

目的:利用Red系統(tǒng)構(gòu)建腸出血性大腸桿菌O157:H7的sRNA基因E40缺失突變株.方法:選取本實(shí)驗(yàn)室預(yù)測(cè)并經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的sRNA基因,根據(jù)NCBI上相應(yīng)的序列,設(shè)計(jì)2對(duì)引物分別擴(kuò)增該sRNA基因的上下游分別長(zhǎng)464和455 bp的同源臂,經(jīng)PCR擴(kuò)增,構(gòu)建到相應(yīng)的載體,最后以構(gòu)建好的含上下游同源臂和卡那零素抗性基因的長(zhǎng)約2500 bp的線性片段作為打靶片段,在Red重組系統(tǒng)的作用下與sRNA基因E40的上下游同源區(qū)域發(fā)生同組,從而把sRNA基因從基因組上置換下來(lái),之后利用質(zhì)粒pCP20將FRT位點(diǎn)間的卡那霉素抗性基因消除.結(jié)果與結(jié)論:構(gòu)建了出血性大腸桿菌O157:H7的sRNA基因E40的缺失突變株,為進(jìn)一步研究sRNA基因在出血性大腸桿菌O157:H7生長(zhǎng)及致病過(guò)程中所起的功能奠定了良好的基礎(chǔ).

作 者： 王剛 宋蘭 馬延 周圍 張德禮 岳俊杰 梁龍 WANG Gang SONG Lan MA Yon ZHOU Wei ZHANG De-Li YUE Jun-Jie LIANG Long   作者單位： 王剛,WANG Gang(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物工程研究所,北京,100071;西北農(nóng)林科技大學(xué),動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西,楊凌,712100)

宋蘭,馬延,周圍,岳俊杰,梁龍,SONG Lan,MA Yon,ZHOU Wei,YUE Jun-Jie,LIANG Long(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物工程研究所,北京,100071)

張德禮,ZHANG De-Li(西北農(nóng)林科技大學(xué),動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西,楊凌,712100) 

刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 腸出血性大腸桿菌O157   H7   sRNA   Red重組系統(tǒng)  

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