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靶向EGFR基因的siRNA表達載體構(gòu)建及其生物學效應(yīng)的研究
目的構(gòu)建靶向表皮生長因子受體(EGFR)基因的小干擾RNA(siRNA)表達載體(pSi-EGFR),并觀察其抑制人肺腺癌細胞株A549中EGFR基因表達的效果及生物學效應(yīng).方法利用Lipofectamine2000將構(gòu)建的pSi-EGFR載體轉(zhuǎn)入A549細胞中,應(yīng)用實時定量熒光PCR、免疫熒光和流式細胞儀檢測EGFR基因mRNA和蛋白水平的表達,并采用四甲基偶氮唑藍顯色法(MTF)、集落形成實驗觀察細胞生長變化.結(jié)果pSi-EGFR可顯著抑制A549細胞中EGFR基因的表達;轉(zhuǎn)染pSi-EGFR細胞生長抑制率為67.8%,集落形成抑制率為59.4%.結(jié)論pSi-EGFR載體能夠在A549細胞中引發(fā)RNA干擾(RNAi)效應(yīng)下調(diào)EGFR基因表達來抑制細胞增殖.
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